Para conhecer alguns fundamentos teóricos da Fluorescência visite a seção Sensor Óptico para Oxigênio Dissolvido (OD).

Conforme mensagem do fórum Fontes de erro em medidas de Fluorescência, a luz de excitação pode sofrer 4 processos:(Fonte Common Errors in Fluorescence Spectroscopy)

https://www.edinst.com/blog/raman-scattering-blog/ Mas além desses processos a luz que chega no detector pode também ser originada do fenômeno de "difração de segunda ordem" nos monocromadores (de excitação e emissão). Como mostra a figura: https://www.edinst.com/wp-content/uploads/2018/11/Figure-1-1-1024x775.png Uma explicação mais detalhada está disponível no link: https://www.edinst.com/blog/second-order-diffraction/ Fiquei pensando até que ponto essas fontes de erros podem ser um problema quando se usam LEDs como fontes de excitação e como detectores. Os LEDs costumam apresentar uma banda de emissão praticamente "monocromática". E por isso vamos minimizar os problemas de "luz espúria" (stray light), pois não vamos precisar de filtros de emissão, e consequentemente evitamos o fenômeno de "difração de segunda ordem". E quando usado como detectores apresentam uma boa "seletividade espectral" e portanto também não vamos precisar de filtros para selecionar a luz de emissão, e consequentemente também evitamos o fenômeno da "difração de segunda ordem". A figura http://www.c2o.pro.br/hackaguas/ar01s21.html#LEDs_emissao_e_sensibilidade_00 mostra como fazer o "casamento" dos LEDs para uso como fonte e detector. Fazendo essas considerações, imagino que o "espalhamento Raman" pode ser um efeito interferente significativo. E nesse caso podemos usar as leituras do branco (solvente puro) para subtrair das leituras da amostra e tentar minimizar a interferência do efeito Raman. In practice, one sometimes finds that the linear dependence on concentration predicted by the Beer-Lambert law does not hold. In the early days of commercial spectrophotometers, these deviations were sometimes due to instrument artifacts such as fluorescence or parasitic light (i.e., light at an unwanted wavelength) reaching the detector. Both of these scenarios would result in an artificially low apparent absorbance. For example, if the actual optical density of a solution is 2, then only 1% of the light at that wavelength is reaching the detector. If there is even a fraction of a percent of parasitic light (light at a different wavelength) in the original beam, which is not absorbed, then this spurious light can make a significant contribution to the total light reaching the detector and the apparent optical density will be reduced. This effect makes it problematic to accurately measure optical densities higher than 2 or 2.5, depending on the instrument design. Modern instruments are usually properly designed to minimize such problems - at least we hope they are! If one absolutely must measure the optical density of a strongly absorbing solution, and for some reason cannot dilute the sample, then one can always utilize a cuvette with a short pathlength - these types of cuvettes are shown in Chapter 3 - which will reduce the optical density to a manageable range. Na prática, às vezes descobre-se que a dependência linear da concentração prevista pela lei de Beer-Lambert não é válida. Nos primeiros dias dos espectrofotômetros comerciais, esses desvios às vezes eram devidos a artefatos do instrumento, como fluorescência ou luz parasita (ou seja, luz em um comprimento de onda indesejado) atingindo o detector. Ambos os cenários resultariam em uma absorbância aparente artificialmente baixa. Por exemplo, se a densidade óptica real de uma solução é 2, então apenas 1% da luz naquele comprimento de onda está alcançando o detector. Se houver mesmo uma fração de um por cento de luz parasita (luz em um comprimento de onda diferente) no feixe original, que não é absorvido, então essa luz espúria pode fazer uma contribuição significativa para a luz total que atinge o detector e a densidade óptica aparente será reduzido. Este efeito torna problemático medir com precisão densidades ópticas superiores a 2 ou 2,5, dependendo do design do instrumento. Os instrumentos modernos são normalmente projetados de maneira adequada para minimizar tais problemas - pelo menos esperamos que sejam! Se é absolutamente necessário medir a densidade óptica de uma solução fortemente absorvente e, por algum motivo, não pode diluir a amostra, então sempre se pode utilizar uma cubeta com um caminho óptico curto - esses tipos de cubetas são mostrados no Capítulo 3 - o que reduzirá a densidade óptica a uma faixa gerenciável. Introduction to Flurescence Scattering of the incident light, that is, turbidity, is a problem often encountered with certain biological samples such as membrane or aggregating protein solutions. One often sees "turbidity" measurements in the literature, for example, to follow protein aggregation processes, and these data are usually presented with "optical density" or "absorbance" plotted on the Y-axis. Turbidity is, in fact, closely related to these terms, but the definition of turbidity (Tb) is given by I = I 0 e - l Tb A dispersão da luz incidente, ou seja, turbidez, é um problema frequentemente encontrado com certas amostras biológicas, como membrana ou soluções de proteína agregada. Muitas vezes vemos medições de "turbidez" na literatura, por exemplo, para seguir processos de agregação de proteínas, e esses dados são geralmente apresentados com "densidade óptica" ou "absorvância" plotada no eixo Y. A turbidez está, de fato, intimamente relacionada a esses termos, mas a definição de turbidez (Tb) é dada por I = I 0 e - l Tb

Possibilidades futuras: Estamos considerando utilizar diferentes técnicas analíticas gerar resultados multivariados que seriam processados por técnicas quimiométricas, tais como o PCA, para fazer a "classificação" de amostras de água antes e depois de um sistema de tratamento e dessa forma monitorar a performance do sistema de tratamento. (purificador) A "distância" entre as amostras na entrada e saída seria o principal indicador de performance. E o padrão de referência seria água destilada. Dentre essas técnicas poderiam ser usados diferentes corantes naturais como: extrato de beterraba, clorofila etc. Ou reagentes químicos como o permanganato de potássio, que é um reagente acessível pois pode ser encontrado em farmácias. O consumo de permanganato de potássio pela matéria orgânica poderia ser uma informação adicional. Mas os extratos vegetais são relativamente instáveis e podem se degradar rapidamente pela contaminação com fungos e/ou bactérias. Poderíamos usar um preservativo como ácido cítrico (ou ácido acético) para preservar a solução estoque. E no momento do uso poderíamos adicionar uma solução de NaOH para tamponar o meio e garantir um pH constante para as reações. O uso de preservativos aumentaria o tempo de estocagem das soluções concentradas de extratos naturais. Para avaliar a performance dos diferentes extratos poderíamos preparar amostras de água concentradas por evaporação.